实验室通过体外转录（IVT）获得的mRNA反应混合物中，除了包含所需的mRNA产物外，还含有多种杂质。这些杂质包括T7 RNA聚合酶、无机焦磷酸酶、NTP、模板DNA、盐离子、各种添加剂以及IVT反应中产生的副产物（如双链RNA和截断RNA片段）。这些杂质可能会对mRNA的功能产生负面影响，例如影响mRNA的量化准确性、降低翻译效率或改变免疫原性。因此，需要通过一系列纯化技术将目标mRNA从IVT混合物中分离出来，以确保其纯度和完整性，从而保证产品的安全性与有效性。

常用的mRNA纯化方法包括氯化锂（LiCl）沉淀、硫酸铵沉淀、磁珠纯化、硅胶柱膜纯化和层析纯化等。其中，沉淀法和磁珠法操作简单快捷，但适用量少，纯化效率有限，适合科研与早期研究应用。而在工业生产中，层析纯化法则被广泛采用。

2024年1月，中科院过程工程研究所张松平团队发表的研究探讨了硫酸铵在室温条件下纯化mRNA的可行性。该研究聚焦于编码增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的mRNA，结果显示，当硫酸铵浓度达到18M时，mRNA的沉淀率超过95%。随着硫酸铵浓度的提高，沉淀速率变化不大。此外，溶解率也是决定mRNA最终回收率的重要指标。研究表明，在高于18M的硫酸铵浓度下，沉淀物能够在3分钟内迅速溶解于不含RNase的水中，溶解率可达90%以上。最佳沉淀条件为2M硫酸铵（AS）、pH值为7.0、温度为20℃，沉淀时间2小时，能达到近乎完美的沉淀和溶出率。

针对mRNA纯化的不同需求，硅胶柱膜纯化法利用硅胶膜表面的硅醇基团与mRNA分子之间的相互作用来实现高效的分离。在高盐条件下，相对带电的mRNA与硅胶膜表面氢键相互作用，从而能够有效结合并在低盐或水溶液中洗脱。同时，硅胶膜对蛋白质等杂质几乎不吸附，使得在高速离心时实现了mRNA与杂质的有效分离。这种安全无毒的材料符合环保理念，有助于保护实验人员健康并减少环境污染。

目前，大规模工业纯化多采用层析法以获取更高的核酸质量和产能。主流的mRNA纯化方法是Oligo(dT)亲和色谱，然而该方法通常无法区分带有Poly(A)尾的单链RNA和杂质双链RNA。因此，结合其他技术如疏水层析和阴离子层析，常常作为补充手段用于提升纯化效果。亲和层析方法的基本步骤可归纳为“高盐结合，低盐洗脱”，具有较高的回收率。

在IVT产物质量较高的情况下，使用蛋白酶K结合TFF工艺进行下游纯化，能够有效去除与核酸结合的蛋白质杂质。值得注意的是，蛋白酶K本身可能会带来免疫原性，因此优化其浓度至关重要。瀚海新酶持续致力于开发适合早期研究的mRNA纯化试剂盒，这些产品操作便捷、无需大型设备，显著提高了纯化效率。

综上所述，瀚海新酶提供全面的mRNA纯化工艺开发服务，致力于为客户提供高性能的解决方案。无论您是早期研究阶段的客户，还是需要工业级量产，瀚海新酶都能够帮助您加速新药开发进程，与【strong>人生就是博-尊龙凯时】共同探索生物医疗的未来。